小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒的操作需遵循标准酶联免疫吸附试验流程，核心步骤如下：
试剂盒组成与储存
预包被酶标板：含抗CAT捕获抗体的96孔板，未使用时密封干燥保存于2-8℃。
CAT标准品：冻干或液体形式，使用前按说明书稀释，剩余部分分装冻存于-20℃。
检测抗体：生物素标记的抗CAT抗体，工作液现配现用，余液-20℃保存。
酶结合物：链霉亲和素-HRP复合物，避光保存于4℃。
底物（TMB）与终止液：TMB为避光保存的显色液，终止液为酸性溶液（如硫酸）。
洗涤缓冲液：浓缩液需按比例用蒸馏水稀释。
样本稀释液：用于稀释血清、血浆等样本。
注意：所有组分使用前需平衡至室温（25℃），避免反复冻融标准品和抗体。
检测原理
采用双抗体夹心法：
预包被抗体捕获样本中的CAT；
生物素化检测抗体与CAT结合；
加入链霉亲和素-HRP形成复合物；
TMB底物显色（蓝色→黄色终止），450nm波长测定OD值，CAT浓度与OD值正相关。
操作流程
样本制备：
血清/血浆：全血离心（3000 rpm, 10分钟），取上清；避免溶血。
组织匀浆：按质量体积比加生理盐水匀浆，离心取上清（3000 rpm, 10分钟）。
细胞上清：离心去除杂质后直接检测。
样本分装冻存于-20℃，检测前充分混匀。
标准品与样本加样：
标准品梯度稀释（通常设6-8个浓度点）；
每孔加样100μL（标准品/样本），覆膜后37℃孵育90分钟。
加检测抗体：
洗板3次（每孔300μL洗涤液）后拍干；
加生物素化抗体工作液100μL，37℃孵育60分钟。
加酶结合物与显色：
洗板3次，加HRP结合物100μL，37℃避光孵育30分钟；
洗板5次，加TMB底物A/B各50μL，避光显色15分钟（蓝色）；
加终止液50μL，立即转为黄色。
读数：
终止后15分钟内用酶标仪检测450nm吸光度（参考波长630nm）。
关键注意事项
质量控制：每板需设空白孔（仅加样本稀释液）、阴性对照（不含CAT的缓冲液）。
洗板：彻底拍干孔内液体，避免交叉污染。
显色控制：显色时间超过20分钟可能导致背景升高。
仪器校准：酶标仪使用前需预热并调零。
安全性：避免皮肤接触终止液/TMB，操作时穿戴实验服及手套。
结果计算
以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（推荐四参数拟合）；
根据样本OD值计算CAT浓度，超出标准曲线范围的样本需稀释后重测。
重要声明：本试剂盒仅供科研使用，不可用于临床诊断。实际操作请以具体试剂盒说明书为准，不同品牌可能存在差异。