鸭新城疫病毒抗体(NDV-Ab)ELISA检测试剂盒使用方法梵态生物

以下是关于如何使用鸭新城疫病毒抗体(NDV-Ab)ELISA检测试剂盒的详细步骤：

实验原理

该试剂盒采用双抗原夹心法测定标本中鸭新城疫病毒抗体(NDV-Ab)水平。具体过程是用纯化的鸭新城疫病毒(NDV)抗原包被微孔板，制成固相抗原，然后向包被抗原的微孔中依次加入鸭新城疫病毒抗体(NDV-Ab)，再与HRP标记的鸭新城疫病毒(NDV)抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物。经过洗涤后，加入底物TMB显色，TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的鸭新城疫病毒抗体(NDV-Ab)呈正相关。最后，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中鸭新城疫病毒抗体(NDV-Ab)浓度。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50ul，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为48ng/L，32ng/L，16ng/L，8ng/L，4ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项

• 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀释过后的标准品应丢弃，不可保存。
• 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
• 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
• 使用一次性吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
• 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
• 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
• 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
• 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
• 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
• 试剂盒保存：2-8℃。
• 有效期：6个月。

以上就是鸭新城疫病毒抗体(NDV-Ab)ELISA检测试剂盒的基本使用方法。请注意，这些步骤仅供参考，具体操作应严格按照试剂盒附带的说明书进行。